drummond显微注射器Nanoject III安装记录

产品名称：Nanoject III显微注射器（美国drummond）

                     PC-100垂直拉制仪（日本Narishige）

                     体式显微镜（PONCHI ）

研究方向：

• 1.蜱媒吸血行为的机制研究

• 2.共生菌影响蜱媒感染病原体的分子机制

• 3.蜱虫繁殖及蜱传疾病的防控应用

Drummond Nanoject III 纳升级显微注射系统，搭配体视显微镜和三维显微操作器，是实验室进行蜱虫显微注射的标准配置。以下是针对硬蜱成蜱 / 若虫（常用）和胚胎的详细注射方法及关键注意事项，适用于病原体感染、基因编辑（RNAi/CRISPR）、药物筛选等实验。

一、实验前准备

1. 设备与耗材

• 核心设备：Nanoject III 注射仪（图中黑色控制器 + 红色注射笔）、体视显微镜（带环形光源）、三维手动显微操作器、CO₂麻醉装置

• 专用耗材：Drummond 原装玻璃毛细管（3.5"×0.5mm ID）、微电极拉制仪、镊子（精细镊 #5）、双面胶 / 石蜡、培养皿、湿盒

• 样品准备：待注射溶液（病原体悬液、dsRNA、质粒等），经 0.22μm 滤膜除菌，避免堵塞针头

2. 注射针制备

1. 使用微电极拉制仪将玻璃毛细管拉制成jian端直径5-10μm的注射针（硬蜱体壁较厚，jian端过细易折断）

2. 用砂轮或针锻仪将针尖斜切 45°，形成锋利的斜面，便于穿透体壁

3. 将注射针安装到 Nanoject III 注射笔的黑色夹头上，拧紧卡盘固定

二、成蜱 / 若虫注射方法（常用）

1. 蜱虫麻醉

• 将待注射蜱虫放入 CO₂麻醉盒中，通入 100% CO₂，麻醉时间 30-60 秒（以蜱虫停止活动但足仍有轻微抽动为宜）

• 麻醉过度会导致蜱虫死亡，麻醉不足则注射时会剧烈挣扎

2. 蜱虫固定

• 在培养皿底部贴一条双面胶，将麻醉后的蜱虫背部朝下粘在胶带上，确保腹部暴露

• 对于未吸血的若虫 / 幼虫，可使用石蜡进行固定：将融化的石蜡滴在蜱虫身体两侧，仅露出注射部位

• 固定时注意不要遮挡气门（位于蜱虫腹部两侧），否则会导致窒息死亡

3. 样品装载

1. 在 Nanoject III 主机上选择手动填充模式，将注射针jian端浸入样品溶液中

2. 点击 "Fill" 按钮，缓慢填充样品至注射针内，避免产生气泡

3. 填充完成后，点击 "Empty" 按钮排出少量液体，确认针头通畅

4. 注射操作

1. 在体视显微镜下（10-20 倍放大），调节显微操作器，将注射针jian端对准注射部位：

• 部位：gang门孔（anal pore），位于蜱虫腹部末端，体壁最薄，注射后存活率最高

• 备选部位：第 3-4 对足之间的节间膜，或腹部侧面的节间膜

2. 轻轻转动显微操作器旋钮，将注射针缓慢刺入蜱虫体腔，刺入深度0.5-1mm

3. 在 Nanoject III 主机上设置注射参数：

• 注射体积：未吸血若虫50-200nL，未吸血成蜱200-500nL，吸血成蜱500-1000nL

• 注射速率：20-50nL/sec，速率过快会导致体腔压力骤增，蜱虫破裂

4. 点击 "Inject" 按钮完成注射，停留 2-3 秒后缓慢拔出注射针

5. 注射后护理

1. 将注射后的蜱虫从双面胶上轻轻取下，放入铺有湿滤纸的培养皿中

2. 在 **25-27℃、相对湿度 > 90%** 的培养箱中恢复 24 小时

3. 恢复后可进行后续实验（如吸血、饲养、检测等）

三、蜱虫胚胎注射方法（用于基因编辑）

1. 胚胎收集

• 将吸血后 7-10 天的雌性硬蜱放入产卵盒中，在 27℃、90% 湿度条件下收集新鲜胚胎（产卵后 1-2 小时内最佳）

• 用次氯酸钠溶液（0.5%）处理胚胎 30 秒，去除表面蜡层，然后用无菌水冲洗 3 次

2. 胚胎固定

• 将处理后的胚胎排列在载玻片上的双面胶带上，腹部朝上

• 用钨丝针轻轻刺破胚胎的卵壳，释放少量卵黄，降低卵内压力（蜱虫卵内压力高，不减压会导致注射时内容物喷出）

3. 注射操作

• 注射针jian端直径1-2μm，注射体积10-50nL / 胚胎

• 注射部位选择胚胎的后端（远离生殖质的区域）

• 注射后将胚胎转移至湿盒中，在 27℃、90% 湿度条件下培养至孵化